银屑病中细胞凋亡相关基因bcl-、Fas、bax的检测

　　摘要 为了探讨细胞凋亡相关基因bcl-2、Fas、bax在银屑病发病中的意义，采用免疫组化ABC法、SABC法检测了这几种基因在15例银屑病组织中的表达。结果发现银屑病的角质形成细胞中抑凋亡基因bcl-2几乎不表达，促凋亡基因Fas、bax阳性表达。提示促凋亡基因Fas、bax在银屑病中发病起重要作用，而抑凋亡基因bcl-2作用可能不大。银屑病的发病机理尚不明确，角质形成细胞异常增生和角化不全是银屑病的主要病理改变，以往对这方面的研究主要集中在免疫学和生化学方面。近年来银屑病与细胞凋亡的关系逐渐受到越来越多学者的重视。国外有学者报道银屑病表皮中角质形成细胞凋亡异常增多。抑凋亡基因bcl-2和促凋亡基因Fas、bax是现今研究较多、较重要的几个细胞凋亡相关基因。为了探讨这几种基因在银屑病发病中的意义，我们采用免疫组化方法检测了银屑病中细胞凋亡相关基因bcl-2、Fas及bax。

　　1 材料和方法

　　1．1 标本来源：采用1994-1997年我院保存的石蜡包埋组织块。寻常型银屑病15例，其中男8例，女7例；年龄11-68岁，平均年龄29.13岁；均为进行期银屑病。6名正常人皮肤组织，皆取自皮肤外科行重睑术、面部美容切除术者的皮肤，石蜡包埋作为对照组。测定前先将石蜡包埋组织块作常规组织切片及HE染色，在光镜下核对诊断，证实其病理诊断无误方采用。

　　1．2 试剂：鼠抗人bcl-2单克隆抗体购自Dako公司，生物素化羊抗鼠单克隆抗体系华美生物制品公司产品。兔抗人Fas多抗、兔抗人bax多抗及链酶亲和素-生物素-过氧化酶复合物免疫组化试剂盒（简称SABC试剂盒）均购自武汉博士德生物工程公司。

　　1．3 方法：载玻片用APES处理后干燥备用，切取4-5μm厚的石蜡切片，常规脱蜡水化。Bcl-2基因的检测参照ABC法稍加改进，阳性对照为正常淋巴结组织，阴性对照以PBS代替一抗。Fas、bax基因的检测采用SABC法，步骤同bcl-2。所有切片经DAB显色后，苏木精复染，脱水透明，中性树胶封片。每张切片随机选取5个高倍视野，每个视野计数200个细胞，计算阳性细胞百分率。阳性细胞定义为细胞质或细胞膜呈棕黄色颗粒。

　　2 结果

　　2．1 bcl-2基因在银屑病组织中的表达：在15例银屑病组织中，bcl-2基因的阳性表达率为13.3%（2/15），且阳性细胞主要分布在真皮层，表皮层几乎未见阳性细胞。而在6例正常皮肤组织中，bcl-2基因的阳性表达率为100%，阳性细胞广泛分布于表皮及真皮层。统计分析显示，银屑病组织中bcl-2基因的表达显著低于正常皮肤组织（P<0.01）。

　　2．2 Fas基因在银屑病组织中的表达：15例银屑病组织中，Fas基因的阳性表达率为93.3%（14/15），阳性细胞主要位于表皮层，特别是棘层和基底层。而在6例正常皮肤组织中，Fas基因的阳性表达率为66.7%（4/6），阳性细胞主要分布在真皮层。统计分析显示，银屑病组织中Fas基因的表达显著高于正常皮肤组织（P<0.05）。

　　2．3 bax基因在银屑病组织中的表达：15例银屑病组织中，bax基因的阳性表达率为93.3%（14/15），阳性细胞主要位于表皮层，特别是在棘层和基底层。而在6例正常皮肤组织中，bax基因的阳性表达率为50%（3/6），阳性细胞主要分布在真皮层。统计分析显示，银屑病组织中bax基因的表达显著高于正常皮肤组织（P<0.05）。

　　3 讨论

　　3．1 银屑病是一种慢性复发性炎症性疾病，其特征为红斑、鳞屑和角化过度。近年来的研究表明，银屑病的发病机制涉及遗传、环境、免疫等多种因素，但具体机制尚未完全明了。细胞凋亡作为维持组织稳态的重要机制之一，在银屑病的发生发展中扮演着重要角色。本研究通过检测银屑病组织中bcl-2、Fas、bax基因的表达情况，进一步探讨了这些基因在银屑病发病中的作用。

　　3．2 本研究结果显示，银屑病组织中bcl-2基因的表达显著低于正常皮肤组织，提示bcl-2在银屑病中的作用可能不大。bcl-2是一种重要的抑凋亡基因，其主要功能是抑制细胞凋亡，维持细胞存活。在正常皮肤组织中，bcl-2基因的表达较高，有助于维持皮肤细胞的正常代谢和更新。而在银屑病组织中，bcl-2基因的低表达可能反映了细胞凋亡机制的失调，导致角质形成细胞异常增生和角化不全，从而促进银屑病的发生发展。

　　3．3 本研究还发现，银屑病组织中Fas、bax基因的表达显著高于正常皮肤组织，提示这两种促凋亡基因在银屑病中起重要作用。Fas是一种重要的死亡受体，其激活可诱导细胞凋亡。bax是一种重要的促凋亡蛋白，其通过与线粒体相互作用，促进细胞色素c的释放，进而激活caspase级联反应，最终导致细胞凋亡。在银屑病组织中，Fas、bax基因的高表达可能反映了细胞凋亡机制的过度激活，导致角质形成细胞凋亡异常增多，进而影响皮肤的正常生理功能。

　　3．4 综上所述，本研究表明，银屑病组织中bcl-2基因的低表达和Fas、bax基因的高表达，可能反映了细胞凋亡机制在银屑病发生发展中的重要作用。这一发现不仅为进一步探讨银屑病的发病机制提供了新的视角，也为寻找新的治疗靶点提供了理论依据。未来的研究可以进一步深入探讨这些基因在银屑病中的具体作用机制，以及它们与其他因素之间的相互作用，为银屑病的预防和治疗提供更多的科学依据。

　　3．5 在当前的医疗实践中，银屑病的治疗仍面临诸多挑战。传统的治疗方法如外用药物、光疗等虽然能缓解症状，但难以根治，且长期使用可能会产生副作用。近年来，随着分子生物学技术的发展，针对特定分子靶点的生物制剂逐渐成为银屑病治疗的新趋势。例如，针对TNF-α、IL-17等细胞因子的生物制剂已显示出良好的疗效。然而，这些治疗方法的长期效果和安全性仍需进一步评估。因此，深入了解银屑病的发病机制，特别是细胞凋亡在其中的作用，对于开发更有效的治疗策略具有重要意义。

　　3．6 此外，本研究还强调了多学科合作的重要性。银屑病的复杂性决定了其研究需要医学、生物学、药学等多个领域的专家共同参与。通过跨学科的合作，可以更好地整合各领域的研究成果，推动银屑病研究的进展。同时，临床医生和基础研究人员的紧密合作，也有助于将实验室的科研成果更快地转化为临床应用，造福广大患者。

　　3．7 最后，本研究也存在一定的局限性。首先，样本量相对较小，可能影响结果的普遍性和可靠性。未来的研究可以通过增加样本量，进一步验证本研究的结果。其次，本研究主要集中在细胞凋亡相关基因的表达水平，而未能深入探讨这些基因的具体调控机制及其与其他因素之间的相互作用。因此，未来的研究可以采用更为先进的技术手段，如基因编辑、蛋白质组学等，进一步揭示银屑病的发病机制，为疾病的防治提供更为全面的科学依据。

　　总之，本研究通过检测银屑病组织中bcl-2、Fas、bax基因的表达情况，初步揭示了这些基因在银屑病发病中的作用，为进一步探讨银屑病的发病机制提供了新的视角。未来的研究应在此基础上，进一步深入探讨这些基因的具体作用机制，为银屑病的预防和治疗提供更多的科学依据。

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